胶体金的制备1、胶体金制备的注意事项（1）玻璃容器的清洁：玻璃容器应保持清洁，用前酸洗、硅化。（2）试剂、水质：实验用水一般用双蒸水。缓冲液有足够大的缓冲容量，浓度不应过高以免金溶胶自凝。2、常用方法一般采用还原法，常用的还原剂有柠檬酸钠、鞣酸、白磷。（1）柠檬酸三钠还原法：取0.01％氯金酸水溶液100ml加热至沸，搅动下准确加入１％柠檬酸三钠水溶液0.7ml，金黄色的氯金酸水溶液在2分钟内变为紫红色，继续煮沸15分钟，冷却后以蒸馏水恢复到原体积，如此制备的金溶胶其可见光区*高吸收峰在535nm，Ａ1cm/535nm=1.12。2）柠檬酸三钠－鞣酸混合还原剂：改变鞣酸的加入量，制得不同大小的胶体颗粒。（3）白磷还原法：制备的胶体金直径约6nm，并有很好的均匀度，但白磷和yimi均易燃易爆，一般实验室不宜采用。准确测量(CMOS扫描，获得图像处理光学分析**)。宁夏胶体金快速检测读数仪品牌
胶体金标记抗体技术：建立于20世纪70年代初，因胶体金液呈樱桃红色，故标记抗体后进行免疫染色，可直接光镜观察。金颗粒的电子密度相当高，电镜下清晰可辨。因此近年来该技术被广泛应用于生物学和医学各领域的电镜研究，自20世纪80年代开始，有取代免疫酶细胞化学电镜技术之趋势。该技术的主要优点：①省时．程序较酶标抗体法简单；②不需H2O2等处理，对组织细胞超微结构保存较好；③金颗粒电子密度高，电镜下容易识别，且易于同其他免疫反应产物区别；④可与酶标抗体或铁蛋白标记抗体等相结合进行双标记染色，研究两种不同抗原在超微结构水平的定位；⑤也可用不同直径的金颗粒标记不同的抗体，研究两种以上抗原的共存；⑥因抗原抗体反应部位结合金颗粒数量的多少与抗原的量呈正相关，故可用于组织细胞抗原的半定量分析；⑦将胶体金标记的一抗体直接加入培养液中，利用培养细胞具有吞饮作用的特点，可进行培养细胞内的抗原定位研究；⑧金颗粒具有较强激发电子能力，故也可用于扫描电镜对细胞表面抗原或一些受体的定位观察；⑨胶体金液无毒，对人体亦无损伤。因此，胶体金标记抗体染色技术是目前免疫电镜技术很常用的理想染色方法。宁夏胶体金快速检测读数仪品牌扁平化软件设计带来简洁的操作体验。
免疫胶体金的制备1、制备胶体金标记蛋白质应注意的问题（1）蛋白质的预处理。蛋白质应先对低离子强度的水透析，去除盐类成分。用微孔滤膜或超速离心除去蛋白质溶液中的细小微粒。（2）低盐浓度的缓冲液。过量盐可使金颗粒发生凝集。（3）当PH接近于蛋白质等电点或略偏碱性。蛋白质所处溶解状态较适合偶联，蛋白质分子在金颗粒表面的吸附量较大。（4）蛋白质适用量的选择：能使胶体金稳定的合适蛋白量再加10％即为*佳标记蛋白量。（5）胶体金与蛋白质偶联后，加入稳定剂，以避免产生凝集。一般选用PEG（分子量为20000）和牛血清白蛋白作稳定剂。2、常见方法（1）用0.1mol/LK2CO3或0.1mol/LHCl调节金溶胶至所需pH。（2）加入*佳标记量的蛋白质溶液，搅拌2～3分钟。（3）加入5ml1％PEG20000溶液。（4）于10000～100000g离心，小心吸去上清液。（5）将沉淀悬浮于一定的缓冲液中，离心沉淀后，再用同一缓冲液恢复，浓度以Ａ1cm/540nm=1.5左右为宜，置4℃保存。
胶体金免疫层析技术是２０世纪８０年代发展起来的，其基本原理与免疫渗滤技术相同。由于其稳定性好、安全、简便，且不需任何仪器设备等优点，被应用于医学检测、农产品农药兽药残留、进出口产品病原微生物检测等领域。免疫层析技术在层析材料上发生的免疫反应，具备免疫反应的高特异性、高效率性、高亲和性的特点。具体过程含有待测物的样品溶液通过纤维层析材料的毛细作用沿着层析材料上移，与固定在层析材料上的针对待测物的受体（抗原或抗体）结合并发生特性免疫反应。在该过程中，抗原抗体复合物不断被积累富集，通过酶反应标记物或直观可视标记物（如胶体金）使之显色，从而达到检测目标物质的目的。采用现代光电技术，用光电传感器测量反射光强度，定量或定性分析金标试纸颜色深浅，计算被测物含量或浓度。
金标免疫试验的原理将氯金酸(HAuCl4)用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒(胶体金)标记抗体，(或金黄色葡萄球菌A蛋白SPA)。金标为一种催化剂，经还原剂(如对苯二酸)处理，将显影剂中的银离子还原成不溶性金属银，沉淀在每个金颗粒的周围，银沉淀在光镜下可清楚地显示。滴金免疫实验原理同一般免疫斑点实验，也是用已知抗原或抗体包被硝酸纤维素膜，再用金标记抗体或抗原进行快速测定。临床应用的有两种方法：金标一步法(层析法)和金标二步法(斑点渗漏法)。具体讲即用两个人HCG—β单克隆抗体，一个抗体吸附于硝酸纤维素薄膜(NC膜)上，另一抗体结合于金溶胶颗粒表面。尿中HCG先与NC膜上的抗体-结合，然后再与金标单抗溶液反应，形成抗体一HCG一金标抗体的加心式复合物．红色的金斑点．内置条形码识别模块，支持试剂条项目自动识别功能。宁夏胶体金快速检测读数仪品牌
应能区分反射率差值不大于0.01的一对质控条。宁夏胶体金快速检测读数仪品牌
胶体金标记蛋白的纯化:（2）凝胶过滤法：此法只适用于以BSA作稳定剂的胶体金蛋白结合物的纯化。将胶体金蛋白结合物装入透析袋，在硅胶中脱水浓缩至原体积的1／5～1／10.再经1500r/min离心20min.取上清加至SephacrylS-400（丙烯葡聚糖凝胶S-400）层析柱分别纯化。层析柱为0.8cm×20cm，加样量为床体积的1／10，以0.02Mol/LPBS液洗脱（内含0.1％BSA，0.05％NaN3，pH8.2者用IgG标记物），流速为8ml/h.按红色深浅分管收集洗脱液。一般先滤出的液体为微黄色，有时略混浊，内含大颗粒聚合物等杂质。继之为纯化的胶体金蛋白结合物，随浓度的增加而红色逐渐加深，清亮透明，然后洗脱出略带黄色的为标记的蛋白组分。将纯化的胶体金蛋白结合物过滤除菌、分装，4℃保存。可得到70％～80％的产量。宁夏胶体金快速检测读数仪品牌
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