胶体金免疫层析(GICA)技术是20世纪90年代初在免疫渗滤技术基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术。胶体金免疫层析(GICA)作为一种可靠的免疫学检测技术,其特异性强、灵敏度高、简便快速、无需特殊仪器设备,在动物检验检疫实际工作中有较强应用价值。目前国内已有少量兽医用商品GICA检测条生产(如瘦肉精检测条、鸡法氏囊、猪旋毛虫和新城疫检测条等)。如果加大研究开发力度,可望将GICA技术用于各种疾病的快速诊断和检测,为实现我国动物检验检疫工作的科学化、标准化和快捷化具有重要意义。可将测试结果实时传送至网络云端。胶体金快速检测读数仪参考价格
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胶体金标记蛋白的纯化(1)超速离心法:根据胶体金颗粒的大小,标记蛋白的种类及稳定剂的不同选用不同的离心速度和离心时间。用BSA做稳定剂的胶体金—羊抗兔IgG结合物可先低速离心(20nm金胶粒用1200r/min,5nm金胶粒用1800r/min)20min,弃去凝聚的沉淀。然后将5nm胶体金结合物用6000g,4℃离心1h;20nm~40nm胶体金结合物,14000g,4℃离心1h.仔细吸出上清,沉淀物用含1%BSA的PB液(含0.02%NaN3),将沉淀重悬为原体积的1/10,4℃保存。如在结合物内加50%甘油可贮存于-18℃保存一年以上。为了得到颗粒均一的免疫金试剂,可将上述初步纯化的结合物再进一步用10%~30%蔗糖或甘油进行密度梯度离心,分带收集不同梯度的胶体金与蛋白的结合物。
胶体金的稳定性溶胶的稳定性介于小分子离子溶液和粗分散相之间,其颗粒作布朗运动,不易受重力影响而下沉。然而,溶胶又是不稳定体系,它的胶粒溶剂化作用很弱,总面积较大、因在胶粒相互碰撞时,有自动合并为较大、较重的颗粒倾向。当胶体颗粒直径变大,超出胶体范围而从介质中沉淀出来的现象叫聚沉。影响其稳定性的主要原因有三点。(1)胶粒间的相互吸引力当胶粒相距很近时,这种吸引力可能导致胶体颗粒合并而变大。(2)胶粒及其溶剂化层胶粒及其溶剂化层(溶剂是水时就是水化层)的带电情况。一种溶胶的各个胶粒都带有相同的电荷。同性电荷相斥,双电子层变厚,胶粒带电量愈大,排斥力愈大,愈能阻止胶粒合并聚结,溶胶愈稳定。(3)胶体接口的溶剂膜当二个固体间夹有一厚层液体时,这层液体膜有一个反抗二固体接近的排斥力。两个胶粒要进一步接近,只有克服它们之间的溶剂化膜的斥力才有可能,因此溶剂膜的斥力是使溶胶稳定的原因之一。适用于胶体金免疫层析试纸条样品的检测。
胶体金标记蛋白质影响因素:胶体金与蛋白质之间是通过正负电荷之间存在的范徳瓦尔引力相结合的,胶体金颗粒与蛋白质分子之间无共价键联系。胶体金标记蛋白质过程属于物理过程,标记体系的pH值、离子浓度及二者的比例等均可影响标记效果,一般情况下,当胶体金pH值接近或大于蛋白质等电点时,胶体金对蛋白质的吸附力强。反之,当胶体金pH值低于蛋白质等电点时,则会凝集而失去结合能力。如在标记葡萄球菌A蛋白(SPA)时,SPA等电点是pI5.1,胶体金的pH值可选择在pH5.9-6.2。标记单抗时,胶体金的pH值适宜在pH8.2。对于含有多种大分子蛋白的样品,如多价抗体的标记,实际上很难满足体系中各种蛋白分子的等电点的要求。为了取得较好的标记条件,可先将标记蛋白用低于pH9.0的缓冲液透析,胶体金的pH值调在pH9.0进行标记。影响胶体金标记蛋白质是否成功的另一个重要因素是胶体金与标记蛋白质的用量比例。通常蛋白质的用量取决于胶体金的颗粒大小,金颗粒直径越小,金颗粒所具有的总表面积就越大,可吸附蛋白质的量也就越大。采用CMOS扫描技术,测量精度高,比色法测量精度较高。胶体金快速检测读数仪参考价格
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胶体金法是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下,可聚合成一定大小的金颗粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态,形成带负电的疏水胶溶液,由于静电作用而成为稳定的胶体状态,故称胶体金。胶体金也是免疫电镜技术中较为理想的免疫标记物。胶体金技术具有方便快捷、特异敏感、稳定性强、不需要特殊设备和试剂、结果判断直观等优点, 因而特别适合于广大基层检验人员以及大批量检测和大面积普查等, 具有巨大的发展潜力和广阔的应用前景。胶体金快速检测读数仪参考价格
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