rRNA 结构既具保守性又具高变性。保守性反映生物物种的亲缘关系, 高变性则揭示生物物种的特征核酸序列, 是属种鉴定的分子基础。 16S rRNA 基因大小适中, 约 1.5Kb 左右, 含有高 度保守的基因片段, 同时在不同的菌株间也含有 变异的核酸片段。因其既能体现不同菌属之间的 差异, 又能利用测序技术快速得到核酸序列, 已成 为理想的基因鉴定靶序列。通过对其序列的分析, 可以判定不同菌属、菌种间遗传关系的远近。细菌 的 16S rRNA 可变区位点结构如下: 可变区序列 因不同细菌而异, 恒定区序列基本保守, 所以可以 利用恒定区序列设计引物将 16S rRN**段扩增 出来, 利用可变区序列的差异来对不同菌属、菌种 的细菌进行分类鉴定。但较其它方法而言, 16S rRNA 序列测定分析更适用于确定属及属以上分 类单位的亲缘关系。ITS 的不同测序会有不同的优势。北京古细菌16S测序服务
精确的方法当数 ＤＮＡ 测
序技术，但存在耗时长、费用高等缺点的限制，无法应用于临床
进行常规 检 测。现 常 用 方 法 仍 是 ＰＣＲ、ＲＦＬＰ、ＳＳＣＰ 等 技
术。在早期采用的方法是 ＰＣＲ 扩增之后直接电泳，比 较 电 泳
图谱差异进行细菌种属的鉴定；如果 ＰＣＲ产物单一，可以利用
ＲＦＬＰ得到不同的酶切片段加以分析或单链构相多态性（ＳＳ－
ＣＰ）加以区分。而１６ｓ～２３ＳｒＲＮＡ 基 因 间 区 与 某 些 基 因（如
ｍｅｃＡ 基因、ｏｍｐ２５和ｏｍｐ３１基因等）联合进行细菌鉴定，与电
导技术相结合或与人工神经网络技术（ＡＮＮ）相结合进行细菌
鉴定等均可提高鉴定的灵敏度和特异度。 北京古细菌16S测序服务上海融享生物科技有限公司测序的 18S 上乘。
由于真核微生物的核糖体 DNA 是由核糖体基
因及与之相邻的间隔区(ITS)组成，使扩增
ITS1 的正向引物落在 18S 亚基上，扩增 ITS1 的反
向引物和扩增 ITS2 的正向引物落在 5.8S，而扩增
ITS2 的反向引物则是落在 28S 亚基上。然而目前并
没有一个较为准确完整的数据库能够提供从 18S 至
28S 全长序列。因此，我们用 ITSx Extractor 从专门
针对 ITS 序列的数据库 Unite 中分别筛选出的
ITS1、ITS2 和 ITS 全长序列，并构建了 3 个新的
数据库。其中，ITS1 数据库的筛选条件为：包含 ITS1
基因，且 ITS1 基因前、IT1 基因后序列长度>100 bp；
ITS2 数据库的筛选条件为：包含 ITS2 基因，且 ITS2
基因前、ITS2 基因后序列长度>100 bp；ITS 基因全
长序列数据库的筛选条件为：序列包含 ITS1 基因，
ITS2 基因、且 ITS1 基因前、ITS1 基因与 ITS2 基
因间隔、ITS2 基因后序列长度>100 bp。
随着分子生物学的发展以及各项新技术的临床广泛应用， 细菌微生物的分类鉴定从鉴定表型特征，深化为基因特征的分 类，在技术提高到细胞分子的水平[1]。16SrRNA、23SrRNA、 16-23SrRNA间隔区、RNA聚合酶的β亚基、超氧化物歧化 酶、DNA促旋酶B基因等是遗传学的候选基因，应用多的 是16SrRNA基因。分子标记法包括RAPD（随机扩增多态性 DNA）、AFLP（扩增片段长度多态性）、REP-PCR（重复基因 外回文序列）。细菌体内基本存在三种核糖体RNA，即16SrRNA 和23 rRNA、5 rRNA，参与细菌的蛋白质的合成过程。其中 16SrRNA比真核生物的相应rRNA略小，16SrRNA及其基因在微 生物鉴定中有重要作用，由于细菌各种属间生理特征和生化特征 相似，单凭传统方法已无法准确的进行分类鉴定，随着科技的发 展，现在已经能通过对细菌DNA，常用的是16SrRNA基因的进 行鉴定区分细菌种属。上海融享生物科技有限公司就带您了解一下16s的特点。
DNA 探针杂交：PCR 扩增含有高变区的部分 16S rRNA 基 因, 然后用根据 16S rRNA 基因中高变区的序列 设计出一系列的种特异性的探针与之杂交。通过 16S rRNA 种属特异性的探针与 PCR 产物杂交以 获得微生物组成信息。此外, 探针也可以直接与样 品进行原位杂交检测, 通过原位杂交不仅可以测 定微生物的形态特征和丰度, 而且能够分析它们 的空间分布, 该方法简单快速, 主要应用于快速检 测, 但可能出现假阳性或假阴性结果。近年来 T Yamamoto 等设计和合成出人肠道 区系中常见的双歧杆菌属 5 个种( 两歧双歧杆菌、 青春双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、短双歧杆菌和长双 歧杆菌) 的特异性的寡核苷酸探针, 它们具有 16~ 19 个碱基长度, 并与这 5 个种的 16S rRNA 序列 互补。用天然高分子量的 RNA 制备物作为靶子, 这些寡核苷酸探针对于人肠道中这些种的菌株具 有高度的种特异性, 结果表明用此法检测这 5 个 种的 16S rRNA 序列能取得所期望的结果, 并且 整个试验过程从获得纯细胞物后只需 6h 可完成。上海融享生物科技有限公司测序16s 价格优惠。北京古细菌16S测序服务
上海融享生物科技有限公司主营测序很多，其中ITS 销很好。北京古细菌16S测序服务
原 核 生物的ｒＲＮＡ 有３类：５ＳｒＲＮＡ、１６ＳｒＲＮＡ 和２３ＳｒＲＮＡ，其 编
码基因（ｒＤＮＡ）长度依次为１２０、１５４０及３３００个 核 苷 酸。它
们位于同一操纵子序列中，但被一些间隔区域所分开，从５′～
３′端 依 次 是：１６Ｓ、间 隔 区、ｔＲＮＡ、间 隔 区、２３Ｓ、间 隔 区 和 ５Ｓ
ｒＲＮＡ［２］，一个操纵子进行转录后处理成为成熟的１６Ｓ、２３Ｓ和
５ＳｒＲＮＡ。ｒＲＮＡ 结构既具保守性又具高变性，保守性反 映 生
物物种的亲缘关系，高变性则揭示生物物种的特征核酸序列，
是属种鉴定的分子基础。因此，可以利用保守区设计通用引
物扩增细菌的相应靶序列，再利用可变区的差异鉴别菌种。其
中以１６ＳｒＲＮＡ 基因及１６Ｓ～２３ＳｒＲＮＡ 基因间区在细菌鉴定
中的应用较为成熟。 北京古细菌16S测序服务