青海SYBR荧光染料qPCR服务

在常规 PCR 基础上添加了荧光染料或荧光探 针 。而用于常规 PCR 的专门热循环仪配备荧光检 测模块 ,可监测扩增时的荧光 。荧光染料能特异性 掺入 DNA 双链, 发出荧光信号, 而不掺入双链中的 染料分子不发出荧光信号 , 从而保证荧光信号的增 加与 PCR 产物增加完全同步 。荧光探针法是指当 标记在探针的 5 ′端荧光报告基团 (reporter R )未被 标记在3 ′端淬灭基团 (quencher Q )影响时, 可检测 到报告基团的荧光信号 。检测到的荧光信号的强度 与 PCR 反应产物的量成正相关,即每扩增一条 DNA 链, 就有一个荧光分子形成, 实现了荧光信号的累积 与 PCR 产物的形成完全同步 。您了解qPCR的优势吗？青海SYBR荧光染料qPCR服务

在采用 SYBR Green I 法进行相对定量时，需要 利用熔解曲线排除非特异产物或引物二聚体对测定结 果的影响。有研究建议在每一个循环中 PCR 延伸后 增加一步，即将温度提高后再检测反应体系中的荧 光［15］。该检测温度大于引物二聚体的退火温度 Tm， 而小于特异性扩增产物的 Tm 值。在此温度下，引物 二聚体都变性成单链，因此只检测到与特异性 PCR 产 物结合的 SYBR Green I 所发出的荧光，消除了引物 二聚体的干扰，降低了非特异性荧光，有助于目标基因 的准确定量。

青海SYBR荧光染料qPCR服务一个好的qPCR项目需要具备哪些特点您知道吗？

复合探针结合了分子信标和杂交探针的优点，由 荧光探针和淬灭探针组成，荧光探针长 25 个碱基左 右，5'端标记荧光基团，3'端磷酸化防止被延伸，淬

灭探针长 15 个碱基左右，3'端标记淬灭基团。当没

细胞因子的表达分析：许多不同类型的细胞都能分

泌低分子量的蛋白质，其中包括淋巴细胞、抗原递呈细

胞、单核细胞、内皮细胞和成纤维细胞。细胞因子可被

分为不同的组；白细胞介素(白细胞介素1~白细胞介素

23)，干扰素(干扰素α，干扰素γ等)，集落刺激因子，

坏死因子，转化生长因子(转化生长因子β等)和化学

因子(单核细胞趋化蛋白1，巨噬细胞炎症蛋白1等)。为

了阐明在许多炎症反应，自身免疫性疾病和移植排

异中的免疫致病途径，细胞因子mRNA表达谱的可靠定

量是很重要的。尽管被检样本中细胞因子含量往往极

低，然而real-time反转录PCR以其高敏感性和准确性在

细胞因子的定量中越来越受到青睐 qPCR的好处您了解多少呢？

双杂交探针也是 TaqM an 探针的衍 生形式,是由 Roche 公司开发的一种 PCR 定量技术 (LightCy cler(r)实时荧光定量 PCR 系统)。该技术 的特点是将荧光基团和淬灭基团分别标记在发光探 针的 5' 端和淬灭探针的 3' 端两个不同探针上 ,两探 针可与模板同一条链相邻的序列杂交, 杂交时两探 针的荧光基团和淬灭基团便紧密相邻(1 ～ 5 bp), 从 而发生 FRET 使荧光淬灭, 荧光淬灭的程度与起始 模板的量成反比, 以此可以进行 PCR 定量分析 (Hardegg er 等 , 2000)。该方法的特点是淬灭效率 高,但由于 2 个探针结合在模板上 ,从而影响到扩增 效率;另外 ,由于需要合成 2 个较长的探针, 合成成 本相对较高。的不同qPCR会有不同的优势。青海SYBR荧光染料qPCR服务

您知道上海融享生物科技有限公司的qPCR都有哪些吗？青海SYBR荧光染料qPCR服务

定量方法：在real-time Q-PCR中，模板定量有两

种策略；相对定量和 Absolute Quantitation。相对定量指的是在

一定样本中靶序列相对于另一参照样本的量的变化。绝

对定量指的是用已知的标准曲线来推算未知的样本的

量。标准曲线法的相对定量：由于在此方法中量的表

达是相对于某个参照物的量而言的，因此相对定量的标

准曲线就比较容易制备，对于所用的标准品只要知道其

相对稀释度即可。在整个实验中，样本的靶序列的量来

自于标准曲线，终必须除以参照物的量，即参照物是

1×的样本，其他的样本为参照物量的n倍。在实验中为

了标准化加入反应体系的RNA 或DNA的量，往往在反

应中同时扩增一内源控制物，如在基因表达研究中，内

源控制物常为一些管家基因(如beta- actin，3-磷酸甘油

醛脱氢酶 ***DH等)。 青海SYBR荧光染料qPCR服务