实时荧光定量 PCR
技术可用于检测特异性突变基因，因为扩增 DNA 的 核苷酸序列不需要分子克隆和宿主细胞内的生长准 备，即可在媒介生物分子纯化过程中直接测得。利用
实时荧光定量 PCR 和间接测序方法，可对已知 DNA 序列进行基因突变及多态性分析。
实时荧光定量 PCR 技术
可用于对转基因产品的检测和定量。目前，该技术在
生物安全检测中的应用主要有: 动物中基因载体
生物分布的确定、生物疗法中残留 DNA 的定量、污染
细胞库和终产物中和细菌核酸的检测、研究
中水平的定量、疫苗中逆转录活性的特 异性检测及遗传稳定性监控中转基因拷贝数的确定 等。实时荧光定量 PCR 技术可达到简便、快速、准确 地检测转基因产品的目的。
一个好的qPCR项目需要具备哪些特点您知道吗？河北TaqMan荧光探针qPCR公司哪家好
荧光定量 PCR 技术在食品监测以及环境监测中均有应
用。食品中可能含有一些有害的细菌，利用荧光定量 PCR 技
术可对食品中的某一细菌进行定量分析，灵敏度和可靠性
高。环境中的微生物，如大气环境中的大肠杆菌，水环境中
的蓝细菌、赤潮藻、假单胞菌，土环境中的炭疽芽孢杆菌是
否超标，严重影响着人类、水生生物以及植物的健康生长，
荧光定量 PCR 技术能对其实现定量分析，对环境进行检测。
另外，荧光定量 PCR 技术也广泛应用于医 学，如疾病的 诊
断、病原体以及基因缺陷性疾病的检测。 河北TaqMan荧光探针qPCR公司哪家好上海融享生物科技有限公司主营qPCR。
虽然在荧光定量 PCR 检测时的过程比较 简单，但是在前期样本制备阶段却存在着很多影响因素，因此从 siRNA 序列的设计、质粒的共转染、细胞总 RNA 的提取、质粒 DNA 的去除、cDNA 的获得、试剂的 选择及后续的操作步骤都应优化稳定到比较好方案，方 能保证其结果的准确性。实时荧光定量 PCR 技术在 mRNA 表达研究、基因组和病毒核酸的定量测定和等位基因的差异分析等领域的应用越来越***。通过本设计性实验可以加深学 生对实时荧光定量 PCR 技术及其应用的理解，为今后 的科研工作打下基础。
实时荧光定量 PCR 技术的方法学：所谓 real-time
Q-PCR 技术，是指在 PCR 反应体系中加入荧光基团，
利用荧光信号累积实时监测整个 PCR 进程，后来通过
标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在
real-time 技术的发展过程中，两个重要的发现起着关
键的作用：①在 20 世纪 90 年代早期，Taq DNA 多聚
酶的 5’核酸外切酶活性的发现，它能降解特异性荧光
标记探针，因此使得间接的检测 PCR 产物成为可能。
②此后荧光双标记探针的运用使在一密闭的反应管中
能实时地监测反应全过程。这两个发现的结合以及相应
的仪器和试剂的商品化发展导致 real-time Q-PCR 方法
在研究工作中的运用。 的不同qPCR会有不同的优势。
实时荧光定量PCR技术(Real-time FluorescentQuantitative PCR，RT-PCR/q-PCR)是20世纪末推出的一种新的核酸定量技术。在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，使每一个循环变得“可见”，后来通过阈值循环数(Threshold cycle，Ct值)和标准曲线对样品中的DNA(或cDNA)的起始浓度进行定量。自从1993年，Higuchi等报道实时荧光定量PCR技术以来，因其具有全封闭单管扩增、简便快速、重复性好、无扩增后处理步骤从而大幅减少了扩增产物污染的可能性，并易于自动化等优点，使其在医学、食品、动植物、微生物学等领域中受到青睐，成为当今研究基因表达水平、病原体鉴定等的热门技术之一。上海融享生物科技有限公司主做的qPCR。河北TaqMan荧光探针qPCR公司哪家好
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相对定量可用于对 2 个样本作为比较组中的基因表达水平进 行比较，确定处理因素施加后基因表达水平的改变。 进行相对定量时，对样本中特定 mRNA 的检测是建立 在参比样本基础上的，将定量测定结果表示为靶 mRNA/参比样本 mRNA 的比值。在假定靶序列和管家基因两者的扩增效率相同 时，可以采用比较阈值法( 2 － ΔΔCt法) 进行相对定量［11］。 该法可以直接得到目的基因相对于管家基因的定量，不必制作标准曲线，简便省时。按照公式 2 －ΔΔCt = 2 －［( 实验组vpr Ct－实验组***DH Ct) －( 对照组vpr Ct－对照组***DH Ct ) ］ 计算各实验组的 2 － ΔΔCt值，将对照组的 2 － ΔΔCt 值设为 1， 实验组与之相比，进行相对定量。河北TaqMan荧光探针qPCR公司哪家好