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内蒙古IHC免疫组化染色

来源: 发布时间:2021-05-06

检测中的显色反应免疫组化显色是一种酶促反应,它通过连结在抗原抗体复合物上的过氧化物酶或碱性磷酸酶与底物DAB发生反应,生成有色的复合物沉淀在组织细胞中的抗原部位。由于标本组织来源不同,细胞分化不一,抗原含量不等,显色反应所需时间不可能完全一致。整个免疫组化过程步骤较多,每步应按操作要求严格操作,脱蜡时间一定要充分。每步PBS冲洗时间、次数一定不能省略,因PBS液内含有盐,可以减少背景染色。滴加试剂时要均匀、足够,要比切片上的组织界限宽出0.05~0.35cm防止出现边缘效应。即使是同一种抗体,由于产品批号不同,其效价可能有差异,因此,新购进的抗体一定要进行预实验,找出比较好条件并进行记录。此外,组织浸液的温度,切片烘烤的温度控制,实验操作过程中的室内温度及抗体的效价等都是影响免疫组化标记质量的重要因素。耐心细致的工作态度,标准化、规范化的操作,是完成实验的基本保证。融享生物公司提供免疫组化,低价格,高服务,提供售后服务。内蒙古IHC免疫组化染色

免疫荧光方法

是较好早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理,先将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光,从而可确定组织中某种抗原的定位,进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便,所以在临床病理诊断、检验中应用较广。2)免疫酶标方法

免疫酶标方法是继免疫荧光后,于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是较好常用的技术。该方法与免疫荧光技术相比的主要优点是:定位准确,对比度好,染色标本可长期保存,适合于光、电镜研究等。免疫酶标方法的发展非常迅速,已经衍生出了多种标记方法,且随着方法的不断改进和创新,其特异性和灵敏度都在不断提高,使用也越来越方便。在病理诊断中广为使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法检测系统等。


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常用染色方法

根据标记物的不同分为免疫荧光法,免疫酶标法,亲和组织化学法,后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法较好常用。判定分析编辑

免疫组化染色(IHC)

免疫组化染色(IHC)

从实验结果而言,免疫组化技术服务主要涉及抗体实验结果的描述与分析,图片的确定与选取,相关数据的提供,上述工作是免疫组化工作的重点内容,只有严格的实验设计,标准的实验操作,专业化的结果分析才能更好的满足客户的要求,这点对于形式为腹水,上清,培养液之类的抗体显得更为重要。关于上述服务内容应该在实验开始前由双方明确,一般而言,客户方实验前应提出需要什么样的结果与分析,例如是简要还是详细的描述实验结果,需要实验数据否,图片的数量与规格等。如果为双盲试验或有第三方参与,则事先申明。


免疫组化镜检

在镜检前可以通过相关资料查询抗体的表达部位:细胞间质、细胞膜、细胞浆、核膜、细胞核以及在其中的多个部位表达(如:MPO抗体表达在细胞膜、细胞浆、核膜、细胞核上)和表达组织(如:VWF抗体在血管壁上表达,呈现环形)。

在显微镜下观察时,先在4倍镜下查找组织及其范围,然后查看整个组织确定阳性产物的表达部位,然后将阳性产物表达部位置于视野正**,换高倍镜观察。细胞凋亡检测

细胞凋亡原理:正常凋亡细胞通过检测凋亡细胞段进行染色,正常的、人为造成凋亡的细胞很少能够被染色。以甲基绿复染,便于从形态学上分辨评估正常细胞和凋亡细胞。

首先确定目标凋亡细胞的组织部位(如眼球组织,由于玻璃体结构内没有细胞核,因此看不到凋亡,在整个组织的较好外面有单层视网膜细胞,因此只能在较好边缘查看凋亡细胞的阳性产物)


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这些常用免疫组织化学方法的原理如下:

1. 免疫荧光细胞化学技术

将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后会发出一定波长的荧光,从而可以确定组织中的抗原定位或定量.

2. 免疫酶细胞化学技术

是免疫组织化学研究中较好常用的技术.基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞或组织内的相应抗原进行定位或定性研究.

3. 免疫胶体金技术

就是用胶体金标记一抗,二抗或其他的能特异性的结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针对组织或细胞内的抗原进行定性,定位或定量研究.由于胶体金的电子密度高,多用于免疫电镜的单标记或多标记的定位研究


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物质所具有的抗原性主要由分布在抗原表面的抗原决定簇决定。固定液的固定对免疫组化的正确结果极其重要,此液能使抗原保存良好。抗原修复的好坏直接影响着免疫组化检测结果的可靠性。在进行免疫组化时并非所有的抗原都要进行抗原修复,抗原性保存良好或基本保存者不需要修复。目前抗原修复的方法主要有蛋白酶消化法、硼氢化钠(NaBH4)修复法和热修复法。较常用的是热修复法,尤其是细胞核抗原经热修复后,其染色效果特别好。热修复包括单纯加热、高压加热和微波加热3种,其原理是以热效应来引导抗原决定基重新暴露。热修复法影响抗原修复的关键因素有两个:一是温度,至少要达到100 ℃,时间3~15 min;二是修复液的pH值为7.5~8.5。所以我们必须清楚影响抗原的因素及各种抗原修复的方法,严格按照抗体说明书进行抗原修复。鉴于抗原修复的方法较多,在实际工作中,究竟选用何种抗原修复,应根据抗体种类予以选择,必要时可以多种方法同时使用,这样使其更具有针对性,标记结果更理想。组化染色结果有很大影响。内蒙古IHC免疫组化染色

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